三种流式细胞术方法检测自噬

发布时间:2020-01-19 17:26:10

1.吖啶橙。
吖啶橙来检测细胞中的酸性囊泡,来反应细胞自噬程度。价格便宜,但特异性欠佳。
试剂配制和步骤见:http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-416-1-1.html
2.LC3-II
LC3-II是自噬最重要的生物学标记,在自噬发生时位于自噬小体内。因此特异性高。与同型对照进行平均荧光强度(MFI)对比,确定自噬发生。
图. Jurkat和K562细胞分别以雷帕霉素、无血清培养、氯喹等因素诱导自噬后的LC3-II的MFI变化。
3.LysoTracker染料。
自噬时,相关细胞器会出现自噬流动,首先形成双层膜的自噬小体,然后与溶酶体融合形成自溶酶体。LysoTracker染料就是检测这些自溶酶体的数量变化。
LysoTracker Green以50 ng/ml在37℃与细胞孵育1小时后,然后以PBS洗涤,标记DAPI (200 ng/ml)区分细胞死活,最后用配备蓝色(488nm)和紫光的流式细胞仪检测。以平均荧光强度(MFI)确定自噬的发生。
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转自流式中文网:https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-4409-1-1.html